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和平精英百科:第二抗體

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第二抗體是指與第一抗體或抗體片斷結合的抗體。第二抗體通常用探針標記,從而可使其應用于檢測、純化或細胞分選。選擇最佳的第二抗體可改善研究結果并減少假陽性或假陰性結果。因此,研究工作中的一個關鍵因素就是選擇合適的第二抗體。由于第二抗體以第一抗體為靶點,我們將對第一抗體作更為詳細的介紹。

第一抗體是由目標抗原(如某種蛋白質、多肽、碳水化合物或其它小分子)產生的抗體,通常未經過標記。由于第一抗體是產生第二抗體的免疫原,我們應更多地了解這類抗體的結構。主要抗體結構可以多種方式進行鑒定;亞諾法提供針對不同結構和區域的第二抗體。在選擇正確的第二抗體前,您需要先理解以下幾點:

  • 第一抗體的種屬來源
    如果您正在使用的第一抗體來自小鼠,您將需要抗小鼠第二抗體。

  • 第一抗體的同型
    第二抗體必須針對正確的 Ig 同型。
    典型的分泌抗體(免疫球蛋白)具有由兩個相同重鏈( α ,δ, ε ,γ和μ)和兩個相同輕鏈(κ和λ)經鏈間雙硫鍵連接在一起形成“Y”形分子。上述二硫鍵位置被稱作鉸鏈區的靈活性區域,這一區域使抗體的各個裂片互相分離,并提供實現與抗體有效結合的足夠靈活性。以下為人類免疫球蛋白的同型:

    分類/同型 重鏈 子類 重鏈
    IgG γ IgG1/IgG2/IgG3/IgG4 γ1/γ2/γ3/γ4
    IgM μ    
    IgA α IgA1/IgA2 α1/α2
    IgE ε    
    IgD δ    

    除根據抗體結構分類外,免疫球蛋白還可通過酶處理分解為多個區域。


    酶處理 抗體區域
    木瓜蛋白酶 F(ab) x 2 +F(c)
    胃蛋白酶 F(ab') +F(c)

  • 第二抗體的目標區域
    我們擁有各種對 Ig 整體分子 (H & L) 或諸如 Fc 或 Fab 區域等抗體片斷具有特異性的第二抗體。

    標的 描述
    IgG (H+L) 與 IgG 分子的重鏈和輕鏈均發生反應,即與 IgG 的 Fc 和 F(ab')2 部分均發生反應。其還可與其它種類的免疫球蛋白發生反應(如IgM、IgA等),原因在于所有的免疫球蛋白均擁有相同的輕鏈(κ 或 λ)。這是一種常用的第二抗體。
    Fc 片斷 與 IgG 重鏈 Fc 部分發生反應。絕大部分情況下,其為 F(ab')2 片斷所吸收;某些情況下,抗體還發生附加吸收,從而最大限度地降低其與 IgM 和 IgA 或與 IgM 單獨發生交叉反應。
    F(ab')2 片斷 與 IgG 的 Fab 部分發生反應。由于其與輕鏈發生反應,其還可與具有相同輕鏈的其他免疫球蛋白發生反應。此種抗體可用于各種特定應用,如雙重標記法或用于具有 Fc 受體的組織或細胞(胸腺、脾臟)。

  • 以便進行下游分析的結合
    第二抗體可與酶、熒光團或生物素相結合,以便進行進一步分析。我們在如下表格中總結了不同結合物的常見用途:

    標記物 結合物 描述
    過氧化物酶 過氧化物酶是一種經濟性好、起效迅速且更為穩定的酶
    堿性磷酸酶 堿性磷酸酶更為靈敏
    熒光團 若丹明/Texas Red/熒光素 常用于雙重或多重染色法
    生物素 生物素 用于放大信號并獲得比酶結合第二抗體或熒光共軛第二抗體更高的靈敏度



 
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